بقايا النيترويميدازول في لحم الخنزير: طريقة Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS تم التحقق منها وفقًا لـ GB 31658.23-2022
2026-10-21
النيتروإيميدازولات هي أدوية اصطناعية مضادة للبكتيريا ومضادة للأوالي تثبط البكتيريا اللاهوائية والتريكوموناس بفعالية. كانت تستخدم على نطاق واسع في الماشية وتربية الأحياء المائية للسيطرة على الالتهابات الهضمية وأمراض الأوالي، مما يحسن معدلات البقاء على قيد الحياة. ومع ذلك، فإن الأدوية الأم ومستقلباتها سامة بشكل واضح: يتم استقلابها بسرعة في الحيوانات إلى عدة مستقلبات نشطة، بعضها يبقى في الأنسجة لفترة أطول بكثير من المركب الأم.
تظهر الدراسات السمية أن مركبات النيتروإيميدازول الأم ومستقلباتها الرئيسية قد تكون مسرطنة ومطفرة ومسببة للتلف الجيني. تدخل المخلفات في الأغذية المشتقة من الحيوانات إلى جسم الإنسان عن طريق سلسلة الغذاء، ويمكن أن يؤدي الاستهلاك طويل الأمد بجرعات منخفضة إلى تعطيل تكوين الدم، وإتلاف الكروموسومات، وزيادة خطر حدوث طفرات جينية. لذلك، حظرت الصين استخدام النيتروإيميدازولات في الحيوانات المنتجة للأغذية، ولا يُسمح بأي مخلفات في الأغذية المشتقة من الحيوانات، مما يجعل اختبار المخلفات الدقيق ضروريًا لسلامة الغذاء.
المعيار الوطني لسلامة الغذاء GB 31658.23-2022، الخاص بمخلفات النيتروإيميدازولات في الأغذية المشتقة من الحيوانات باستخدام كروماتوغرافيا سائلة مقترنة بمطياف الكتلة الترادفي، هو الأساس القانوني لهذا العمل. ويشمل الأدوية الأم والمستقلبات في مصفوفات لحوم الأبقار والأغنام وغيرها من الحيوانات. احتاج مختبر اختبار إلى سير عمل مُصادق عليه للحوم الخنزير يغطي أربعة مركبات مستهدفة - ميترونيدازول، هيدروكسي ميترونيدازول، ديميتريدازول، وهيدروكسي ديميتريدازول - بما في ذلك المستقلبات الهيدروكسيلية التي يصعب الاحتفاظ بها وتأينها، عند مستوى أقل من جزء في المليار، مع انخفاض انتقال الحمل ودقة مستقرة عبر تسلسلات حقن طويلة.
| البند | التكوين |
|---|---|
| نظام LC-MS/MS | جهاز Wanyi LCMS-TQ9200 ثلاثي الرباعي |
| عمود التحليل | C18، 1.6 ميكرومتر، 2.1 × 100 مم |
| المرحلة المتحركة أ | 0.1% حمض الفورميك في الماء |
| المرحلة المتحركة ب | 0.1% حمض الفورميك في الأسيتونيتريل |
| معدل التدفق | 0.3 مل/دقيقة |
| درجة حرارة العمود | 40 درجة مئوية |
| حجم الحقن | 4 ميكرولتر |
| معدات مساعدة | حمام بالموجات فوق الصوتية، خلاط دوامي، جهاز طرد مركزي عالي السرعة، حمام مائي، مبخر نيتروجين، ميزان تحليلي |
وزن 2 جرام من العينة (بدقة 0.05 جرام) في أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل، أضف 10 ميكرولتر من محلول العمل القياسي الداخلي المختلط بتركيز 1 ميكروجرام/مل، قم بالخلط الدوامي لمدة 30 ثانية واتركه لمدة 10 دقائق. أضف 15 مل من أسيتات الإيثيل، قم بالخلط الدوامي لمدة دقيقتين، ثم قم بالطرد المركزي عند 10000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. انقل الطبقة العليا وكرر الاستخلاص مرة أخرى مع 15 مل إضافية من أسيتات الإيثيل. اجمع المستخلصين وقم بالتبخير حتى الجفاف تحت النيتروجين في حمام مائي عند 25 درجة مئوية.
قم بإذابة البقايا في 5 مل من حمض الهيدروكلوريك بتركيز 0.1 مول/لتر، قم بالخلط الدوامي لمدة دقيقة واحدة، أضف 5 مل من الهكسان، قم بالرج لمدة دقيقة واحدة، ثم قم بالطرد المركزي عند 5000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. تخلص من طبقة الهكسان وكرر خطوة إزالة الدهون مرة أخرى مع 5 مل إضافية من الهكسان. قم بتجهيز خرطوشة استخلاص الطور الصلب بـ 3 مل من حمض الهيدروكلوريك بتركيز 0.1 مول/لتر و 3 مل من الميثانول، قم بتحميل الطبقة المائية، اغسل بـ 3 مل من حمض الهيدروكلوريك بتركيز 0.1 مول/لتر، ثم قم بالاستخلاص بـ 4 مل من الميثانول. قم بتبخير المستخلص حتى الجفاف عند 35 درجة مئوية تحت النيتروجين، أعد تكوينه في 0.5 مل من الماء، قم بالخلط الدوامي لمدة دقيقة واحدة، ثم قم بالترشيح قبل الحقن.
| المعلمة | النتيجة |
|---|---|
| وقت التشغيل | تم فصل أربعة مواد تحليلية بالإضافة إلى المعايير الداخلية في غضون 8 دقائق، قمم متناظرة، استجابة قوية |
| الخطية | معايرة مطابقة للمصفوفة عند 2، 4، 20، 40، 200 و 400 ميكروجرام/لتر؛ R2 أعلى من 0.9995 لجميع المركبات الأربعة، انحراف أقل من حد 20% |
| حد الكشف (LOD) وحد الكمية (LOQ) | نسبة الإشارة إلى الضوضاء أعلى من 3 عند 0.5 ميكروجرام/كجم وأعلى من 10 عند 1 ميكروجرام/كجم، تلبي متطلبات حد الكشف 0.5 ميكروجرام/كجم وحد الكمية 1 ميكروجرام/كجم |
| الدقة (ن = 6) | الانحراف المعياري النسبي (RSD) أقل من 6% عند 2 نانوجرام/مل وأقل من 3% عند 20 نانوجرام/مل، مقابل حد 10% |
| الانتقال الحمل | حقن فارغ بعد أعلى معيار 400 نانوجرام/مل أقل بكثير من 20% من مساحة ذروة حد الكمية (LOQ) |
| استرداد العينة المضافة | 61.8% إلى 103.35% عند 2 نانوجرام/مل و 104.35% إلى 107.15% عند 20 نانوجرام/مل، ضمن متطلبات 60% إلى 120% |
| عينة لحم خنزير حقيقية | لم يتم الكشف عن أي من مركبات النيتروإيميدازول الأربعة |
المعايرة المطابقة للمصفوفة في مستخلص لحم خنزير فارغ تعوض عن قمع الأيونات من مصفوفة اللحوم وتحافظ على موثوقية القياس الكمي عند مستوى أثري. كانت أشكال الذروة جيدة بدون ذيل، مما يؤكد أن استخلاص أسيتات الإيثيل، وإزالة الدهون بالهكسان، وتنقية الطور الصلب (SPE) تزيل التداخلات عند 1 ميكروجرام/كجم.
قدم نظام Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS طريقة مُصادق عليها لأربعة مخلفات نيتروإيميدازول في لحم الخنزير بموجب GB 31658.23-2022. القمم المتناظرة، R2 أعلى من 0.9995، الدقة ضمن 10%، انتقال حمل ضئيل، واسترداد ضمن 60% إلى 120% توضح أن سير العمل يلبي المتطلبات الروتينية النوعية والكمية للفحص والتأكيد للأدوية البيطرية المحظورة، ويوفر أساسًا تقنيًا موثوقًا لمراقبة مخاطر سلامة الغذاء.
- يمنح اكتساب MRM ثلاثي الرباعي الانتقائية اللازمة لتأكيد المخلفات المحظورة عند 0.5 ميكروجرام/كجم في مصفوفة لحوم دهنية.
- كيمياء C18 أقل من 2 ميكرومتر على عمود 2.1 مم بمعدل 0.3 مل/دقيقة تفصل أربعة مواد تحليلية في أقل من 8 دقائق، مع استهلاك منخفض للمذيبات.
- المعايير الداخلية الموسومة بالنظائر تصحح خسائر الاسترداد أثناء الاستخلاص وتنقية الطور الصلب (SPE)، مما يثبت النتائج عبر الدفعات.
- إزالة الدهون بالهكسان قبل تنقية الطور الصلب (SPE) تحمي الخرطوشة والعمود التحليلي، مما يطيل عمر الخدمة في مختبرات المخلفات عالية الإنتاجية.
