2025-10-16
جهاز الكشف عن انتشار الضوء بالتبخر (ELSD) هو جهاز كشف جديد للكتلة مع التطبيق النظري لأي مركب يمكن أن يشكل جسيمات غازية.تُحدد الطبعة 2025 من الصيدلة استخدام الكشف عن انتشار الضوء عن طريق التبخر (ELSD) لتحليل ومراقبة جودة أكثر من 100 نوع من الأدويةفي الممارسة العملية، يتم تطبيق ELSD بشكل متكرر على المركبات التي تفتقر إلى امتصاص الأشعة فوق البنفسجية (UV) ، مثل astragaloside، والكربوهيدرات، والامينوجليكوزيدات، والكوليسترول،غالباً ما تكون طريقة اكتشاف مكملة لمستشعرات الأشعة فوق البنفسجية والفلوروسنتومع ذلك، فإن نتائج ELSD تتأثر بعوامل متعددة، بما في ذلك تكوين المرحلة المتحركة، وتركيز المذيب العضوي، ونمط الإلقاء، وظروف التشويش.لضمان نتائج تحليلية دقيقة ومتسقة، من الضروري تقييم تأثير هذه العوامل على النتائج.
هذه الدراسة ، التي تستند إلى طريقة التحليل لـ spectinomycin hydrochloride من الجزء الثاني من 2025 Pharmacopoeia وتسترشد بمبادئ ICH QbD ،استخدم تصميم تجريبي متعامد لفحص وتحسين الظروف التحليلية.
الشكل 1 سبكتينوميسين هيدروكلوريد
2أداة وطريقة
في هذه الدراسة، تم إجراء تحليل الكروماتوجرافية باستخدام نظام HPLC من سلسلة LC3200 من Wayeal. تشكيل الأداة شمل مضخة التدرج الرباعية،حجرة عمودتم تنفيذ التحكم في النظام واستحواذ البيانات / معالجتها باستخدام برنامج الكروماتوجرافي SmartLab 2.0.
الجدول 1 شروط HPLC
| عمود الكروماتوجرافية | نوفا أتوم PC18 (4.6*250mm، 5μm) |
| المرحلة المتنقلة | 0.1mol/L محلول مائي من حمض Trifluoroacetic |
| معدل التدفق (mL/min) | 0.6 |
| درجة حرارة العمود | 35 |
| حجم الحقن (μL) | 20 |
| درجة حرارة المزلق ELSD (°C) | 85 |
| درجة حرارة البخار ELSD (°C) | 80 |
| درجة حرارة الكشف عن ELSD (°C) | 50 |
| معدل تدفق الغاز (SLM) | 0.2 |
3إعداد المحلول
محلول العينة:تم توفير محلول السلطة من سبكتينوميسين هيدروكلوريد من قبل العميل بتركيز ملصق 10 ملغ / مل ونقاء 99. 8٪.
0.1M محلول مائي من حمض الثلاثي الفلوروسيتيك:بيبيت دقيق 6.8mL من حمض trifluoroacetic في 1000mL بلوزة حجمية. تخفيف إلى العلامة مع الماء المطهر وخلط جيدًا. وأخيرًا، تصفية الفراغ المحلول من خلال 0.مرشح غشاء السليلوز 45μm قبل الاستخدام.
الحلول القياسية:تم تخفيف المحلول الأساسي بالماء المطهر لإعداد محلول العينة بتركيز 0.15025035050، و 0.70mg/mL ، على التوالي. تم بعد ذلك تصفية كل محلول من خلال مرشح غشاء السليلوز 0.45μm قبل الاستخدام.
4النتائج والمناقشة
يستخدم الصيدلي الصيني ظروف كروماتوغرافية متطابقة لتحليل المواد ذات الصلة ومحتوى المكون الرئيسي تحت إدخال سبكتينوميسين هيدروكلوريد.تقول الطريقة أن "المكشف يمكن تكوينه بناء على الظروف الفعليةخلال الدراسة، مع الأخذ بعين الاعتبار الخصائص الأداة من ELSD3260، ومتطلبات طريقة التحليل، والأدبيات ذات الصلة،تم استخدام تصميم تجريبي بلاكيت بورمان لفحص العديد من المعلمات التجريبية (الجدول 2 و 3)بعد ذلك ، تم استخدام تصميم Box-Behnken (الجدول 4) لتحسين استجابة منطقة الذروة للكاشف ELSD.
الجدول 2 التصميم التجريبي لبلاكيت بورمان
| لا، لا، لا | معدل التدفق ((mL/min) | درجة حرارة العمود ((°C) | درجة حرارة المزلق (°C) | درجة حرارة البخار (°C) | درجة حرارة الكشف (°C) | معدل تدفق الغاز (SLM) | التعويضات بعد العمود |
| 1 | 0.8 | 35 | 60 | 50 | 50 | 0.4 | لا.. |
| 2 | 0.6 | 35 | 50 | 60 | 50 | 0.6 | لا.. |
| 3 | 0.6 | 30 | 60 | 60 | 50 | 0.4 | نعم.. |
| 4 | 0.8 | 30 | 60 | 60 | 40 | 0.6 | لا.. |
| 5 | 0.6 | 35 | 60 | 50 | 40 | 0.6 | نعم.. |
| 6 | 0.8 | 30 | 50 | 50 | 50 | 0.6 | نعم.. |
| 7 | 0.8 | 35 | 50 | 60 | 40 | 0.4 | نعم.. |
| 8 | 0.6 | 30 | 50 | 50 | 40 | 0.4 | لا.. |
الجدول 3 تحليل ANOVA لنتائج تجربة بلاكيت بورمان
| مصدر الاختلاف | المعامل | قيمة t | قيمة p | الأهمية |
| معدل التدفق | -ستة687 | -ثمانية10 | <0.01 | 2 |
| درجة حرارة العمود | 0.191 | 0.22 | 0.824 | 6 |
| درجة حرارة المزلق (°C) | 5.342 | 6.29 | <0.01 | 3 |
| درجة حرارة البخار (°C) | 4.135 | 4.87 | <0.01 | 4 |
| درجة حرارة الكشف (°C) | 0.171 | 0.21 | 0.842 | 7 |
| معدل تدفق الغاز (SLM) | - عشرة.381 | - اثنا عشر23 | <0.01 | 1 |
| التعويضات بعد العمود | - اثنين.559 | -ثلاثة02 | <0.01 | 5 |
كما يمكن أن نرى من الجدول 3 ، أظهرت معدل تدفق الغاز ، ومعدل تدفق المرحلة المتنقلة ، وتعويض ما بعد العمود آثار سلبية. على وجه التحديد ، خفض معدل تدفق الغاز ومعدل تدفق المرحلة المتنقلة ،جنبا إلى جنب مع تعطيل التعويض بعد العمود، يمكن أن تزيد من استجابة الذروة الكروماتوغرافية. ومع ذلك، فإن خفض معدل تدفق المرحلة المتحركة قد يؤدي إلى زيادة توسيع الذروة وانخفاض حساسية الكشف.تم الحفاظ على معدل التدفق بما يتفق مع الطريقة القياسيةفي حين أن درجة حرارة العمود ودرجة حرارة الكشف أظهرت تأثيرات إيجابية، فإنها لم تعزز بشكل كبير قيمة الاستجابة.ستتركز الدراسات اللاحقة على تحسين معدل تدفق الغاز، درجة حرارة المزلق، ودرجة حرارة البخار.
تأثيرات معدل تدفق الغاز ودرجة حرارة المكثفودرجة حرارة البخار على قيمة الاستجابة تمت التحقيق بها باستخدام تصميم تجريبي Box-Behnken في إطار منهجية سطح الاستجابةتم تقديم التصميم التجريبي في الجدول 4.
الجدول 4 التصميم التجريبي بوكس بينكن
| لا، لا، لا | معدل تدفق الغاز (SLM) | درجة حرارة المزلق (°C) | درجة حرارة البخار (°C) |
| 1 | 0.15 | 75 | 80 |
| 2 | 0.15 | 85 | 80 |
| 3 | 0.25 | 75 | 80 |
| 4 | 0.25 | 85 | 80 |
| 5 | 0.15 | 80 | 75 |
| 6 | 0.15 | 80 | 85 |
| 7 | 0.25 | 80 | 75 |
| 8 | 0.25 | 80 | 85 |
| 9 | 0.2 | 75 | 75 |
| 10 | 0.2 | 75 | 85 |
| 11 | 0.2 | 85 | 75 |
| 12 | 0.2 | 85 | 85 |
| 13 | 0.2 | 80 | 80 |
The detection conditions for spectinomycin hydrochloride were determined by simulating the peak area variation using response surface methodology (Figure 2) and considering the instrumental parameter ranges: درجة حرارة المزلق 85 درجة مئوية، درجة حرارة البخار 80 درجة مئوية، درجة حرارة الكاشف 50 درجة مئوية، ومعدل تدفق الغاز 0.2 SLM.
A. تأثير معدل تدفق الغاز ودرجة حرارة البخار على منطقة الذروة
B. تأثير معدل تدفق الغاز ودرجة حرارة المكسر على منطقة الذروة
ج - تأثير درجة حرارة المكثف ودرجة حرارة البخار على منطقة الذروة
الشكل 2 التغير في منطقة القمم
دقة الحقن
تم تخفيف محلول مخزن من سبكتينوميسين هيدروكلوريد إلى 0. 35mg/ ml، وتم إجراء ستة حقن متتالية في الظروف الكروماتوجرافية المحددة مع تسجيل الكروماتوجرامات.تم حساب الانحرافات القياسية النسبية (RSD٪) لوقت الاحتفاظ ومناطق الذروة للذروة الكروماتوغرافية لـ spectinomycin hydrochlorideويتم عرض النتائج في الجدول 5.
الجدول 5 نتائج اختبار دقة الحقن
| لا، لا، لا | وقت الاحتفاظ (دقيقة) | قمة الهواء (SU*s) |
| 1 | 7.625 | 259.124 |
| 2 | 7.615 | 245.223 |
| 3 | 7.618 | 270.250 |
| 4 | 7.608 | 237.267 |
| 5 | 7.627 | 254.977 |
| 6 | 7.613 | 255.548 |
| RSD (%) | 0.09 | 4.49 |
الخصوصية
وفقًا للمبادئ التوجيهية ICH Q2 ((R2) بشأن التحقق من صحة الإجراءات التحليلية والفصل العام من الصينية الصيدلانية 9101 Guidelines on Analytical Method Validation ،تم التحقق من صحة الطريقة المُحسّنة من حيث الخصوصية، النطاق الخطي، الدقة، والتكرار.
تم تحليل المياه المطهرة و محلول العينة (0.35 ملغ/ مل) بالتوازي مع الرسومات الوراثية المسجلة.لم تظهر النتائج (الشكل 3) أي ذروة كروماتوغرافية في وقت احتفاظ هيدروكلوريد سبكتينوميسين في كروماتوجرام المياه المطهرةفي حين أن ذروة سبكتينوميسين هيدروكلوريد في محلول العينة حققت انفصال خط الأساس من القمم المجاورة (R > 1. 5).
الشكل 3 نتائج التحليل لعينة سبكتينوميسين هيدروكلوريد (0.35mg/ml)
نطاق خطي
تحضير ثلاث عينات متوازية من محلول سبكتينوميسين هيدروكلوريد الأساسي وفقًا لطريقة تحضير المحلول القياسية، وتحليلها في ظروف كروماتوغرافية.وتسجيل الكروماتوجرامإجراء تحليل الانحدار باستخدام مناطق الذروات الكروماتوغرافية والتركيزات المقابلة.
الشكل 4 نتائج اختبار الخطيّة (المتحوّل حسب الحساب مقابل غير المتحوّل)
وفقاً للأدبيات، فإن العلاقة بين قيمة استجابة ELSD والتركيز غير خطية.يتطلب تحويل لوغاريتمي لكل من قيمة الاستجابة والتركيز قبل إجراء تحليل الانحدار [8].,9بعد تطبيق التحول اللوغاريتمي على البيانات التجريبية، تجاوز معامل الارتباط في منحنى الانحدار الخطي 0.999، وهو أفضل بكثير من النتيجة التي تم الحصول عليها دون تحويل لوغاريتمي (كما هو موضح في الشكل 4).
دقة و قابلية التكرار
تم تخفيف محلول سبكتينومايسين هيدروكلوريد الرئيسي إلى تركيزات 0.25035، و 0.50mg/mL. لكل تركيز، تم إعداد ثلاث عينات موازية، وتحليلها في ظل الظروف الكروماتوغرافية المحددة، وتم تسجيل الكروماتوجرامات.تم حساب المحتوى باستخدام منحنى الانحدارتم تقييم الاسترداد والإعادة. يتم عرض النتائج في الجدول 6.
الجدول 6 نتائج اختبار الاسترداد
| لا، لا، لا | القيمة الفعلية (mg/ml) | القيمة المحسوبة (mg/Ml) | الاسترداد (%) | استرداد RSD (%) |
| 1 | 0.25 | 0.252 | 100.8 |
1.36 |
| 2 | 0.25 | 0.251 | 100.4 | |
| 3 | 0.25 | 0.246 | 98.4 | |
| 4 | 0.35 | 0.348 | 99.4 | |
| 5 | 0.35 | 0.352 | 100.6 | |
| 6 | 0.35 | 0.344 | 98.3 | |
| 7 | 0.50 | 0.505 | 101.0 | |
| 8 | 0.50 | 0.513 | 102.6 | |
| 9 | 0.50 | 0.504 | 100.8 |
حدّة الكميّة (LOQ)
يتم تخفيف محلول ستريبتوميسين هيدروكلوريد الأساسي إلى تركيز 12 ميكروغرام/ميل. يتم تحليل العينة في ظروف كروماتوجرافية وتسجيل الكروماتوجرام.حساب نسبة الإشارة إلى الضوضاء (S/N) للقمة الكروماتوجرافية لـ streptomycin hydrochloride وتحديد قابلية تكرارهاوتظهر النتائج في الجدول 7.
الجدول 7 نتيجة اختبار LOQ
| لا، لا، لا | SNR | مساحة الذروة (SU*s) | مساحة الذروة RSD (%) |
| 1 | 15.647 | 3.416 |
8.45 |
| 2 | 10.634 | 2.928 | |
| 3 | 15.728 | 3.145 | |
| 4 | 12.842 | 3.529 | |
| 5 | 14.662 | 3.396 | |
| 6 | 11.076 | 3.730 |
وتشير النتائج إلى أنه بموجب متطلبات المبادئ التوجيهية لـ ICH S/N > 10الاختلاف المعياري النسبي لمنطقة الذروة لهذا التركيز من محلول سبكتينوميسين هيدروكلوريد يستوفي المعاييرولذلك، يمكن أن يكون بمثابة معيار الحد الأقصى الكمي لـ spectinomycin hydrochloride.
5الاستنتاج
استناداً إلى الطريقة الصيدلانية، أنشأت هذه الدراسة إجراء تحليلي موثوق وقوي لتحديد كمية هيدروكلوريد سبكتينوميسين.تم تحسين ظروف جهاز الكشف عن انتشار الضوء بالتبخر (ELSD) بشكل منهجيأظهرت الطريقة المُحسّنة استقرارًا ودقةً محسّنةً، وحساسية اكتشاف أعلى، ومدى خطيّ مرضي.
كاشف ELSD3260 هو كاشف ذو تدفق منقسم ذو درجة حرارة منخفضة تم تصميمه وتطويره حديثًا وهو مناسب لتحليل المواد غير المتطايرة وشبه المتطايرةمما يوفر بديلاً قيماً للمركبات التي تفتقر إلى امتصاص الأشعة فوق البنفسجيةفي هذه الدراسة، أدى استخدام ELSD3260 لتحليل هيدروكلوريد سبكتينوميسين إلى قيم استجابة ممتازة ويمكن إعادة إنتاجها، جنبا إلى جنب مع تحسين حساسية الكشف.تظهر هذه النتائج أن هذا الجهاز مناسب بشكل جيد للتحليل الكمي لـ spectinomycin hydrochloride.
أرسل استفسارك مباشرة إلينا
