تحديد محتوى الكافيين في المشروبات عن طريق الكروماتوجرافية السائلة

تفاصيل القضية

الكافيين هو قليل الحمض الطبيعي الميثيلكسانتين الموجود على نطاق واسع في المواد الخام مثل حبوب القهوة وأوراق الشاي وفول الكاكاو.يعمل كمضاف وظيفي أساسي ومركب نكهة مميز في المشروبات المتاحة تجارياًيمكن أن يؤدي تناول الكافيين بشكل معتدل إلى تأثيرات فيزيولوجية مثل تنعش العقل وتخفيف التعب.مع ذلكويمكن أن يؤدي الاستهلاك المفرط والطويل الأمد إلى حدوث ردود فعل سلبية بسهولة، بما في ذلك النبضات القلبية والأرق والإثارة العصبية المفرطة.الأطفال، والأفراد الذين يعانون من أمراض القلب والأوعية الدموية لديهم عتبات أقل.وضعت معايير سلامة الأغذية في العديد من البلدان حدود تنظيمية واضحة لحجم الكافيين في المشروبات.

في الصين، المعيار الوطني لسلامة الأغذية بعنوان "تحديد الكافيين في المشروبات" (GB 5009.139-2014) بمثابة الأساس القانوني لتحديد الكمية الكافيين في مصابيح المشروباتالرسم البياني السائل عالية الأداء (HPLC) ، بسبب دقة ممتازة، والقدرة القوية على مقاومة تداخل المصفوفة، ودقة كمية عالية،أصبحت الطريقة المفضلة لتحليل عينات مصفوفة معقدة، بما في ذلك المشروبات المركبة المختلفة والمشروبات التي تحتوي على الحليب والمشروبات الوظيفية العشبية.تم إجراء هذه التجربة وفقًا لطريقة الكروماتوجرافية السائلة عالية الأداء المحددة في المعيار الوطني GB 5009.139-2014، الذي يضع بروتوكولًا لمعالجة العينات المسبقة وفصل الكروماتوجرافية السائلة / الكشف عن عينات المشروبات،وإنجاز تحديد النوعية والتحليل الكمي للكافيين في أنواع مختلفة من المشروبات.

الكلمات الرئيسية: الكروماتوجرافية السائلة عالية الأداء الكافيين المشروبات تحديد المحتوى

1أداة ومستجيبات

1.1 قائمة تكوينات نظام التلوين السائل

الجدول 1. قائمة تكوينات الأدوات

لا، لا، لا	الاسم	كمية
1	نظام LC3500 للكروماتوجرافي السائل	1
2	P3500B مضخة التدرج الثنائية عالية الضغط	1
3	CT3500 فرن العمود	1
4	AS3500 عينة ذاتية عالية الأداء	1
5	محطة بيانات الكروماتوجرافيا SmartLab CDS 2.0	1
6	C18 العمود، 5μm، 4.6 × 250 مم	1

1.2 قائمة المفاعلات والمعايير

الجدول 2 قائمة المواد المفاعلة والمعايير

لا، لا، لا	المفاعل أو المعيار المرجعي	درجة النقاء
1	الميثانول	الدرجة LC
2	مياه نقية للغاية	‬‬
3	أكسيد المغنيسيوم	درجة AR
4	حمض التريكلوروسيتيك	درجة AR

1.3 المواد التجريبية والمعدات المساعدة

منظف بالموجات فوق الصوتية

خلاط الدوران

0.45μm غشاء فلتر المرحلة المائية الميكروبورية.

2طريقة التجربة

2.1 إعداد الحلول القياسية

2.1.1 محلول الكافيين القياسي (2،0mg/mL): يزن بدقة 20mg من مقياس الكافيين المرجعي (إلى أقرب 0.1mg) في علبة حجمية 10mL ، يذوب ويُملأ بحجم مع الميثانول.تخزين في الثلاجة عند 4°ج. مدة الصلاحية هي 6 أشهر.

2.1.2 محلول متوسط قياسي من الكافيين (200μg/mL): تحويل بدقة 5.0mL من محلول القاعدة القياسية الكافيين (2.1.1) في قنينة حجميّة 50 مل، وتملأ بحيث يصل حجمها بالماء.°ج. مدة الصلاحية شهر واحد.

2.1.3 محلولات العمل القياسية للكافيين للوجهة المعايرة: نقل 0.5 مل، 1.0 مل، 2.0 مل، 5.0 مل، و 10.0 مل من محلول الكافيين المتوسط القياسية (2.1.2) إلى قارورات حجميّة منفصلة بـ 10 مل، وتملأ بحيث يصل حجمها بالماء.0μجرام/مليتر، 20.0μجرام/مليتر، 40.0μغرام/مليتر، 100μج/ميل، و 200μg/ ml على التوالي، استعد مباشرة قبل الاستخدام

2.2 المعالجة المسبقة للعينات

2.2.1 المشروبات من نوع الكولا

(أ) إزالة الغازات: الصوتية العينة باستخدام منظف بالموجات فوق الصوتية في 40°"سي" لمدة 5 دقائق

(ب) التطهير: يزن 5 غرام من العينة (مع دقة 0.001 غرام) ، ونقل إلى قنينة 5 مل.وتحقيق الحجم بالماء (ضمان أن محتوى الكافيين في محلول العينة يقع ضمن نطاق منحنى المعايرة). خلط جيداً. أضف 0.5 غرام من أكسيد المغنيسيوم ، هز جيداً ، واترك الوقوف. خذ المادة المرتفعة وقم بتصفيتها من خلال غشاء ميكروبوري للتحليل اللاحق.

2.2.2 منتجات القهوة والشاي السائلة التي تحتوي على الحليب

يزن 1 غرام من العينة (بدقة 0.001 غرام) ، ويتم نقلها إلى قارورة حجميّة من 10 مل.وتحقيق الحجم مع محلول حمض الثلاثي الخلوي (ضمان أن محتوى الكافيين في محلول العينة يقع ضمن نطاق منحنى المعايرة)خلط جيدًا ودعها تقف لترسب البروتين. خذ المادة المرتفعة وقم بتصفيتها من خلال غشاء ميكروبوري للتحليل اللاحق.

2.3 ظروف التجربة

2.3.1 الظروف الكروماتوغرافية

العمود: C18، 4.6×250ملم، 5μم

المرحلة المتحركة: الميثانول/الماء = 24/76 (v/v)

معدل التدفق: 1.0 مل/دقيقة

درجة حرارة العمود 25°ج

طول موجة الكشف: 272nm

حجم الحقن: 10μ(ل)

3نتيجة التجربة

3.1 فارغة