تحديد بقايا β-ناهض في لحم الخنزير باستخدام نظام Wayeal LCMS-TQ9200 للكروماتوغرافيا السائلة - مطياف الكتلة الترادفي

هذه التجربة تشير إلى "GB 31658".22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkتشير النتائج التجريبية إلى أن اختبار ملاءمة النظام أظهر قمم ذات شكل جيد وخطية جيدة ، تلبي المتطلبات التجريبية.كانت متكررة وقت الاحتفاظ للحلول العاملة القياسية لـ β-agonist أقل من 1%، وكانت نسبة تكرار منطقة الذروة أقل من 3٪ ، مما يشير إلى تكرار جيد..2ng/ mL و 0.5ng/ mL كانت أكبر بكثير من 3 و 10 على التوالي ، وتلبية المتطلبات التجريبية.

لم يتم الكشف عن أي مضادات β-agonists في اختبار عينة لحوم الخنزير. جميع البيانات المذكورة أعلاه تلبي متطلبات الأدوات المحددة بواسطة الطريقة القياسية.

الكلمات الرئيسية:الرمومات السائلة - طيف الكتلة المتزامن؛ الـ β- Agonists؛ الكلينبوتيرول؛ سلامة الأغذية.

1أدوات ومستجيبات

1.1 قائمة تكوين نظام LCMS

الجدول 1 قائمة تشكيلات الأدوات

1.2 المفاعلات والمعايير

الجدول 2 قائمة المفاعلات والمعايير

1.3 المواد التجريبية والمعدات المساعدة

منظف بالموجات فوق الصوتية

خلاط الدوران

حمام المياه الحرارة الثابتة المزج

طرد مركزي عالي السرعة

2طريقة التجربة

2.1 المعالجة المسبقة للعينة

2.1.1 التحليل الهيدروليكي الإنزيمي والاستخراج

يزن 2 غرام من العينة (مع دقة ± 0.05 غرام) في أنبوب طرد مركزي 50 مل. يضاف 6 مل من 0.2 مول / لتر من محلول عازل حمض الأمونيوم و 40 ميكرو لتر من β-glucuronidase / arylsulfatase.ويتم الحضانة في درجة حرارة 37 درجة مئوية في الظلام مع الهز في حمام ماء لمدة 16 ساعة. يُسمح بالتبريد إلى درجة حرارة الغرفة لاستخدامها لاحقاً

2.1.2 الاستخراج والتنقية والتركيز

خذ المحلول المعد، أضف 100μL من محلول العمل القياسي الداخلي 100ng / mL، والدوامة لخلط جيدا، والطرد المركزي عند 8000r / min لمدة 8 دقائق. جمع السوبرناتنت، وإضافة 5mL من 0.1mol/L محلول حمض البيركلوريك، الدوران لخلط، وتعديل الـ pH إلى 1.0 ± 0.2 باستخدام حمض البيركلوريك. بعد الطرد المركزي عند 8000r/min لمدة 8 دقائق، ضبط الـ pH من السوبرناتانت إلى 10 ± 0.5 باستخدام محلول هيدروكسيد الصوديوم 10mol/Lإضافة 15 مل من أسيتات الإيثيل، هز بسرعة متوسطة لمدة 5 دقائق، والطرد المركزي عند 5000r / min لمدة 5 دقائق. جمع الطبقة العضوية العليا. إلى الطبقة المائية المتبقية،إضافة 10 مل من ترت-بوتيل ميثيل إيثيريتم هزها بسرعة متوسطة لمدة 5 دقائق، وتطويرية في 5000r / min لمدة 5 دقائق، وجمع الطبقة العضوية العليا.يحلّ البقايا في 5 مل من محلول حمض النمل بنسبة 2% ويُوضع جانباًإعداد عمود استخراج صلب في مرحلة التبادل الكاتيني المختلط عن طريق تنشيطه بالتسلسل مع 3 مل من الميثانول و 3 مل من حمض النملة 2 ٪. تحميل المحلول المعد على العمود،غسل متتالية مع 3mL من حمض النملة 2٪ و 3mL من الميثانول، وتجفف تحت الفراغ. تحلل العمود بـ 3 مل من محلول الميثانول الأموني 5٪. تبخر الميثانول إلى الجفاف تحت تيار النيتروجين عند 50 درجة مئوية. إعادة حل البقايا في 0.5 مل من الميثانول.محلول حمض النمل بنسبة 1% (10:90، v/v) ، مزج جيدًا ، وتصفية من خلال غشاء ميكروبوروس 0.22μm للتحليل عن طريق الكروماتوجرافية السائلة - طيف الكتلة المتزامن.

2.2 ظروف التجربة

2.2.1 الظروف الكروماتوجرافية السائلة

عمود الكروماتوجرافية C18, 1.8μm 2.1*100mm

المرحلة المتحركة: أ: 0.1% حمض النمل في الماء؛ ب: الميثانول

معدل التدفق: 0.3 مل/دقيقة

درجة حرارة العمود: 40°C

حجم الحقن: 3μL

3اختبار ملاءمة النظام

يظهر اختبار ملاءمة النظام أن القمم المستهدفة لها شكل جيد دون تدخل من قمم الشوائب الأخرى ، مما يلبي المتطلبات التجريبية.

الشكل 1 كروماتوجرام اختبار سبعة β-agonists (1ng/mL)

3.2 النطاق الخطي

أخذ محلولات beta-agonist القياسية واستخدام محلولات العمل المتوسطة التركيز، تم إعداد منحنى قياسي تدريجيا. المدى الخطي لسبعة beta-agonists كان 0.5 ‰ 50 ng / mL،مع R2 > 0.99مما يشير إلى علاقة خطية جيدة.

الجدول 3 جدول النطاقات الخطيّة لـ β-agonists

الشكل 2 كروماتوجرام المنحنى القياسي لسبعة β-agonist

3.3 حد الكشف (LOD) وحد الكمية (LOQ)

في هذه الطريقة ، يتم تعيين حد الكشف (LOD) وحد الكمية (LOQ) لـ β-agonists عند 0.2ng / mL و 0.5ng / mL على التوالي. لكل مركب في هذه الطريقة ،نسبة الإشارة إلى الضوضاء عند التركيزات المحددة لـ LOD و LOQ أكبر من 3 و 10، على التوالي ، تلبية متطلبات الحساسية التجريبية.

الجدول 4 نسب الإشارة إلى الضوضاء المقابلة لـ LOD و LOQ لكل مركب

الشكل 3 كروماتوجرامات الأيونات لسبعة β-agonists عند تركيز LOD و LOQ

3.4 اختبار الدقة

تم أخذ محلول مختلط من المواد القياسية الـ β-agonist بتركيزات منخفضة ومتوسطة وارتفاعية و تم حقنها ست مرات متتالية لمقارنة وقت الاحتفاظ و انحرافات منطقة الذروة.يتم عرض النتائج في الجدول أدناهأظهرت جميع الـ β-agonists انحرافات في وقت الاحتفاظ بأقل من 1٪ وانحرافات في منطقة الذروة بأقل من 3٪ ، تلبية المتطلبات التجريبية.

الجدول 5 اختبار الدقة لكل مركب

الشكل 4 تحليل دقيق للكروماتوجرامات من سبعة β-agonists (6 حقن)

3.5 اختبار العينة

تم اختبار عينات لحم الخنزير التي تم شراؤها من السوق وفقًا لطريقة المعالجة السابقة المذكورة ، ولم يتم الكشف عن أي مضادات β.لم تلاحظ أي قمم كروماتوجرافية في أوقات الاحتفاظ التي تتوافق مع الـ β-agonists السبعة.، في حين أن القمم الأخرى تمثل إشارات المصفوفة بعد التحلل المائي الإنزيمي.

الشكل 5 كروماتوجرام اختبار عينة لحوم الخنزير

4الاستنتاج

تستخدم هذه الطريقة نظام الـ Wayeal LCMS-TQ9200 للكروماتوجرافي السائل - نظام طيف الكتلة المتزامن لتحديد الـ β-agonists في لحوم الخنزير.تظهر البيانات أن جميع قمم الكروماتوجرافية تظهر شكل جيد دون ذيل، الحساسية تلبي المتطلبات التجريبية، معامل الارتباط الخطي يتجاوز 0.99، والدقة مرضية مع انحرافات وقت الاحتفاظ أقل من 1٪ وانحرافات منطقة الذروة داخل 3٪ لستة حقن متتالية من كل مركب.لم يتم اكتشاف أي مناهضين β في اختبارات عينة لحوم الخنزيرتشير هذه النتائج إلى أن الطريقة، المجهزة بنظام Wayeal LC-MS/MS، تلبي متطلبات الكشف النوعي والكمي الروتينية للمحللات المستهدفة.